1、紫色杆菌（Chromobacterium violaceum) CV026，自身不产生N-酰基-高丝氨酸内酯（AHLs）类信号分子，仅当外源AHLs信号分子出现时，菌株才能够产生紫色菌素，并检测出环境中的信号分子C4-HSL～C8-HSL。
2、C.violaceum是一种革兰氏阴性菌, 其紫色杆菌素的产生受群体感应系统的严密调控, 可以作为群体感应抑制活性的筛选模型[1].C.violaceum ATCC12472是一种野生型紫色杆菌, 它可以自主产生信号分子调控紫色杆菌素的产生.而C.violaceum CV026是C.violaceum ATCC31532的mini-Tn5的突变体, 不能自主产生信号分子, 因此不会产生紫色杆菌素，只有当添加外源信号分子时, 才能启动其群体感应系统并产生紫色杆菌素[2].
3、CV026菌种的复苏： 将-80℃保存的紫色杆菌CV026接种于LB肉汤，30℃过夜培养。以2%接入量接种于10 m L含有10μg/mL卡那霉素的LB肉汤中，30℃培养24h,用于后续实验。
4、AHLs标准品：C4-HSL、C6-HSL、C8-HSL、C10-HSL、C12-HSL、C14-HSL、3-oxo-C8-HSL、3-oxo-CiO-HSL、3-oxo-Ci2-HSL、3-oxo-Ci4-HSL 购买自美国Sigma。
5、群体感应 (quorum sensing, QS) 是细菌细胞间交流的一种通讯机制, 具有QS机制的细菌通过感知环境中低分子质量、可扩散的信号分子来调控菌体密度,并在信号分子达到阈值时启动相关基因表达, 从而调控细菌的生理行为, 以适应环境的变化。
群体感应 (Quorum sensing, QS) 是微生物的一种细胞密度依赖的信号传感系统.它可以通过其自身分泌的信号分子感知细胞密度的变化, 一旦细胞密度达到阈值时, 会启动其调控的基因表达调控微生物群体的行为, 如生物发光、生物膜形成、群集运动、色素产生以及毒素产生等. 破坏病原菌群体感应系统可以显著降低其毒力因子的表达水平, 而不影响其生长繁殖, 理论上不会导致耐药性的形成.
6、 细菌AHLs产物的检测实验方案
取待检测菌在37度条件下，培养基6ｈ、12ｈ、18ｈ、24ｈ、30ｈ、36ｈ、42ｈ培养菌液，离心（10000转/min，10min)，取上清，保存备用。
LB中添加琼脂（琼脂添加量1％）灭菌后，将活化的报告菌紫杆菌CV026取5ml加入到50ml LB琼脂中，混合均匀后倒平板。待凝固后，在平板中间打孔，将待检细菌培养上清液加入孔中。在28度培养24ｈ，观察颜色变化，测量变色直径。CV026菌液自身的上清为阴性对照。
7、QS抑制剂检测实验:菌株CV026过夜活化两次后, 按2%接入量接种于含有20μg/m L卡那霉素的新鲜LB肉汤中, 160 r/min振荡培养16~18 h, 与100 m L含有20μg/ml C6-HSL (信号分子) LB营养琼脂培养基混合, 倒平板, 待凝固后用牛津杯打孔, 将200μL不同剂量的绿薄荷精油 (0.5、1.0、1.5μL/m L和2.0μL/m L) 加到孔中。将平板置于28℃条件下培养1~2 d, 观察紫色菌素的产生情况。以体积分数50%甲醇溶液作为阴性对照。
QS抑制剂 (QS inhibitors, QSIs) 是指那些可以阻断细菌种内或种间信息交流, 对细菌QS现象具有抑制或干扰作用的物质。
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[1]DANIEL M, GILLES G, URS S, et al.Effects of natural and chemically synthesized furanones on quorum sensing in Chromobacterium violaceum[J].BMC microbiology, 2004, 4 (1) :1-10.
[2]MOROHOSHI T, KATO M, FUKAMACHI K, et al.Nacylhomoserine lactone regulates violacein production in Chromobacterium violaceum type strain ATCC 12472[J].Fems microbiology letters, 2008, 279 (1) :124-130.
[3]刘丽. 群体感应AHLs信号分子对鱼源杀鲑气单胞菌致腐及抗胁迫能力的影响[D].浙江工商大学,2018.
[4]梅永超,李婷婷,刘楠,王当丰,赫彬彬,励建荣.绿薄荷精油对温和气单胞菌群体感应现象及其腐败特性的抑制作用[J].食品科学,2018,39(15):17-23.
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